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Micotoxinas: importância na alimentação e na saúde humana e animal, Notas de estudo de Agronomia

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Tipologia: Notas de estudo

Antes de 2010

Compartilhado em 15/10/2008

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Baixe Micotoxinas: importância na alimentação e na saúde humana e animal e outras Notas de estudo em PDF para Agronomia, somente na Docsity! ISSN 1677-1915 1 1 0 Outubro, 2007 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Embrapa Agroindústria Tropical Fortaleza, CE 2007 ISSN 1677-1915 Outubro, 2007 Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Embrapa Agroindústria Tropical Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento Francisco das Chagas Oliveira Freire Icaro Gusmão Pinto Vieira Maria Isabel Florindo Guedes Francisca Noélia Pereira Mendes Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Documentos 110 Apresentação As micotoxinas são metabólitos secundários produzidos por uma varie- dade de fungos, especialmente por espécies dos gêneros Aspergillus, Fusarium e Penicillium. Na posição de um dos países líderes na produ- ção de alimentos agrícolas e de commodities, o Brasil possui condições ambientais excelentes para o crescimento de todos esses fungos mico- toxigênicos. São reconhecidos os efeitos deletérios desses compostos sobre a saúde humana e animal, sendo capazes de induzirem efeitos carcinogênicos, hepatotóxicos e mutagênicos. Sabe-se, atualmente, que cerca de 25% de todos os produtos agrícolas produzidos no mundo estão contaminados com alguma micotoxina. A crescente preocupação dos países importadores quanto à presença de micotoxinas nos alimen- tos tem levado à elaboração de legislações cada vez mais rígidas, no que concerne aos níveis máximos de micotoxinas permitidos. O Brasil, a exemplo de outros celeiros mundiais, deverá enfrentar em breve difi- culdades cada vez maiores para exportação de seus produtos agrícolas. Estudos conduzidos no Brasil têm comprovado que muitos alimentos, rações e ingredientes apresentam níveis de contaminação por micoto- xinas muitas vezes superior ao permitido pela legislação brasileira, bem como pela internacional. Em virtude de sua grande extensão territorial, o Brasil tem encontrado dificuldades para implementar as leis e os regu- lamentos existentes para o controle de micotoxinas nos nossos produ- tos. As informações sobre a importância e a distribuição de micotoxinas nos nossos produtos agrícolas e commodities são ainda escassas, não obstante a elevada qualidade das pesquisas conduzidas nessa área por cientistas nacionais. É com satisfação que a Embrapa Agroindústria Tropical põe à dispo- sição de estudantes e profissionais interessados na sanidade de ali- mentos, uma revisão atualizada acerca das principais micotoxinas em alimentos, rações e ingredientes, além de informações sobre legislação dessas substâncias em todos os continentes. Espera-se, através do trabalho em apreço, alertar a todos os envolvidos na proteção da saúde pública, além de se tentar evitar problemas à economia do país. Lucas Antônio de Sousa Leite Chefe-Geral Embrapa Agroindústria Tropical Sumário Introdução ............................................................. 9 Principais Micotoxinas .............................................. 12 Regulamentação de Micotoxinas no Brasil e no Mundo . 28 Considerações Finais ............................................... 36 Referências ............................................................ 38 11Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Não obstante, nenhuma dessas definições seja suficiente para caracte- rizar as micotoxinas, em um aspecto todos os pesquisadores concor- dam, elas estão amplamente incorporadas aos alimentos e seus deriva- dos, constituindo-se em um sério problema de saúde pública (BENNETT e KLICH, 2003). Aliás, a ocorrência de micotoxinas em alimentos e derivados não é um problema apenas de países em desenvolvimento. Micotoxinas afetam o agronegócio de muitos países, interferindo ou até mesmo impedindo a exportação, reduzindo a produção animal e agrí- cola e, em alguns países, afetando, também, a saúde humana (JELINEK et al., 1989; MILLER, 1995; LEUNG et al., 2006). Cálculos confiáveis demonstram que aproximadamente 25% a 50% de todas as commodi- ties produzidas no mundo, especialmente os alimentos básicos, estão de alguma forma contaminadas com micotoxinas (BHAT e MILLER, 1991; MANNON e JOHNSON, 1985). Nos países em desenvolvimento, o problema é ainda mais sério. Como os produtos de boa qualidade são normalmente exportados, aquelas commodities de qualidade inferior, as quais apresentam níveis de micotoxinas superiores aos permitidos nos países importadores, são vendidas e consumidas no mercado interno, com riscos evidentes para a saúde da população (DAWSON, 1991). As micotoxinas podem entrar nas cadeias alimentares humana e animal por meio de contaminação direta ou indireta. A contaminação indire- ta de alimentos e rações ocorre quando um ingrediente qualquer foi previamente contaminado por um fungo toxigênico, e mesmo que o fungo tenha sido eliminado durante o processamento, as micotoxinas ainda permanecerão no produto final. A contaminação direta, por outro lado, ocorre quando o produto, o alimento ou a ração, se torna conta- minado por um fungo toxigênico, com posterior formação de micoto- xinas. Sabe-se que a maioria dos alimentos e rações pode permitir o crescimento e o desenvolvimento de fungos toxigênicos, tanto durante a produção, quanto durante o processamento, o transporte e o armaze- namento (FRISVAD e SAMSON, 1992). A ingestão de micotoxinas por seres humanos ocorre principalmente pela ingestão de produtos vege- tais contaminados, bem como pelo consumo de produtos deriva- dos dos alimentos, tais como leite, queijo, carnes e outros produtos animais (SMITH et al., 1995). 12 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Principais micotoxinas Aflatoxinas – Antes de 1960, o interesse nas espécies do grupo do Aspergillus flavus se concentrava apenas no uso de algumas estirpes no processamento de alimentos na Europa e no Oriente, além da habi- lidade de alguns isolados no parasitismo de insetos (BEUCHAT, 1978). Na verdade, o termo micotoxina foi criado em 1962, quando ocorreu a famosa mortalidade de perus jovens, na Inglaterra, após a ingestão de torta de amendoim proveniente do Brasil e da África (BLOUT, 1961; FORGACS, 1962). Após a confirmação de que um metabólito secun- dário produzido por A. flavus era o responsável pelas mortes das aves, verificou-se uma verdadeira corrida para o estudo desssas toxinas. O termo aflatoxina foi formado a partir do nome do seu principal agente produtor (Aspergillus flavus toxina). As principais aflatoxinas conheci- das são denominadas de B1, B2, G1 e G2, com base na fluorescência delas sob luz ultravioleta (B=Blue, G=Green) e na sua mobilidade durante a realização de cromatografia de camada delgada (Fig. 1). Fig. 1. Estruturas químicas das aflatoxinas B1, B2, G1 e G2. O O aflatoxina B1 O O O O O O aflatoxina G1 O O O O O O aflatoxinas G2 O O O O aflatoxinas B2 O O O O O O 13Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Elas são produzidas por A. flavus, A. parasiticus, embora mais recen- temente as espécies A. nomius, A. bombycis, A. pseudotamari e A. ochraceoroseus tenham também se mostrado aflatoxigênicas (KURTZ- MAN et al., 1987; PETERSON et al., 2001; MOSS, 2002). Com exce- ção de A. flavus e A. parasiticus, as demais espécies mencionadas são de ocorrência pouco freqüente na natureza. Sob o ponto de vista mi- cológico, existem enormes diferenças qualitativas e quantitativas com relação à capacidade aflatoxigênica de isolados de A. flavus. Sabe-se que apenas 50% das cepas dessa espécie produzem aflatoxinas. Dentre os isolados aflatoxigênicos alguns chegam a produzir até 106 μg/kg (KLICH e PITT, 1988; COTTY et al., 1994). Alguns substratos são extremamente favoráveis ao crescimento de fungos aflatoxigênicos e à formação de aflatoxinas. A contaminação natural de cereais, sementes oleaginosas, amêndoas, especiarias e de outras commodities é ocorrência comum em inúmeros países. Tanto a habilidade genética para a formação de aflatoxinas, quanto a capacidade para a contaminação dos alimentos com essas toxinas, são altamente variáveis entre os fungos. Algumas culturas tornam-se contaminadas ainda no campo, antes da colheita, enquanto que outras se contaminam após a colheita, quando são armazenadas em condi- ções de elevada umidade e temperatura (KLICH, 1987; DIENER et al., 1987). No caso de amêndoas de cajueiro, por exemplo, uma das rotas de infecção mais comum confirmada no Brasil é através da invasão das flores (FREIRE & KOZAKIEWICZ, 2005). A habilidade dos fungos na invasão floral foi brilhantemente discutida em recente publicação por Ngugi e Scherm (2006). Em virtude da capacidade de se ligarem ao DNA das células, as aflato- xinas afetam a síntese proteica, além de contribuirem para a ocorrên- cia da aplasia tímica (ausência congênita do timo e das paratireóides, com conseqüente deficiência da imunidade celular; também conhecida como síndrome de Di George) (RAISUDDIN, 1993). Aflatoxinas têm propriedades oncogênicas e imunosupressivas, induzindo infecções em pessoas contaminadas com essas substâncias. Elas contribuem, ademais, para patologias em viciados em heroína, bem como em recém-nascidos de 16 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Tricotecenos – Os tricotecenos constituem um grupo de, aproximada- mente 150 metabólitos produzidos por fungos dos gêneros Fusarium, Myrothecium, Phomopsis, Stachybotrys, Trichoderma, Trichotecium, Verticimonosporium e, possivelmente, outros fungos mais (COLE e COX, 1981; SCOTT, 1989; UENO, 1983). O termo tricoteceno é deri- vado de tricotecina, o primeiro membro da família identificado. Todos os tricotecenos se caracterizam por possuirem um esqueleto tetracíclico 12,13-epoxitricoteno (Fig. 3). tipo A T2: (R1 = OAc) HT2 (R1 = OH) tipo B DON (R1 = OH, R2 = H, R3 = OH, R4 = OH) NIV (R1 = OH, R2 = OH, R3 = OH, R4 = OH) 3-AcDON (R1 = OAc, R2 = H, R3 = OH, R4 = OH) 15-AcDON (R1 = OH, R2 = H, R3 = OAc, R4 = OH) FUS-X (R1 = OH, R2 = OAc, R3 = OH, R4 = OH) Fig 3. Estruturas químicas de tricotecenos do tipo A e B. O C H H2 H Cl NC O O O CH3 O O OH CH3 CH2 H C3 H H H o o o H R1 R2 R3 R3 17Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal A despeito do elevado número de moléculas já identificadas, apenas al- gumas delas ocorrem naturalmente. Dentre os tricotecenos mais impor- tantes, podem ser citados o desoxinivalenol (DON), o nivalenol (NIV), a toxina T2, a toxina HT2 e o diacetoxiscirpenol (DAS). Os tricotecenos são reconhecidos pela forte capacidade de inibição da síntese proteica eucariótica, interferindo nos estágios inicial, de alongamento e do termi- nal da síntese proteica. Os tricotecenos foram os primeiros compostos comprovadamente envolvidos na inibição da atividade da transferase peptídica (STAFFORD e McLAUGHLIN, 1973; WEI et al., 1974). O DON é uma das micotoxinas mais comumente encontradas em grãos. Quando ingerido em doses elevadas por animais, ela causa náuseas, vômitos e diarréia. Quando ingerida por porcos e por outros animais, em pequenas doses, pode provocar perda de peso e recusa alimentar. Por induzir esses sintomas o desoxinivalenol é conhecido como vomi- totoxina ou fator de recusa de alimento. Embora menos tóxico que os outros tricotecenos, o DON é mais comum em sementes de cártamo, ce- vada, centeio, trigo e em misturas de alimentos (MILLER et al., 2001). Tem sido levantada a hipótese de que a toxina T2 e o DAS estariam associados à doença Aleuquia Tóxica Alimentar, a qual afetou milhares de pessoas em Orenburg, uma região da antiga União Soviética, durante a Segunda Guerra Mundial. As pessoas doentes teriam se alimentado de grãos infectados por Fusarium sporotrichioides e Fusarium poae (JOFFE, 1978; LUTSKY et al., 1978). Os sintomas da doença incluem inflamação da pele, vômitos e danos aos tecidos hepáticos. Outros tricotecenos são amplamente produzidos pelos fungos Myrothecium, Stachybotrys e Trichothecium. Dentre eles, destacam- se a atranona, a roridina, a satratoxina e a verrucarina (HINKLEY e JARVIS, 2001). DON e a toxina T2 têm sido detectadas, no Brasil, associadas a grãos de milho, a farelo de trigo e a produtos de panificação (FURLONG et al., 1995; PRADO et al., 1997; OLIVEIRA e SOARES, 2001). O fungo Stachybotrys atra (anteriormente denominado de Stachy- botrys chartarum) tem sido associado a uma modalidade inusitada de micotoxicose. Os tricotecenos macrocíclicos produzidos por esse 18 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal fungo localizam-se tanto nos esporos (conídios), quanto nos próprios fragmentos micelianos. A inalação dos propágulos fúngicos teria sido responsável por um surto de pneumonia hemorrágica em crianças da cidade de Cleveland (USA). A doença é também conhecida como hemosiderose pulmonar. A estaquibotriose já havia sido confirmada como uma doença ocupacional de agricultores envolvidos na manipula- ção de feno mofado. Nesse caso, os sintomas típicos da micotoxicose são sangramentos nasais e traqueais. Este fungo tem sido, também, associado à síndrome dos edifícios doentes (Sick Building Syndrome). Por ser um eficiente produtor de celulase, o fungo degrada materiais ricos em celulose, tendo ainda extraordinária capacidade para sobre- viver em locais úmidos como tetos, forros de diversas naturezas e até mesmo em tubulações de ar condicionado. A dispersão aérea dos propá- gulos torna-se, conseqüentemente, bastante facilitada. Os tricotecenos produzidos por S. atra (atranonas, roridina, estaquilisina, satratoxinas, tricoverróis, trocoverrinas e verrucarinas, dentre outros) são inibidores da síntese proteica em células eucarióticas, podendo provocar cefaléia, irritação na garganta e nos olhos, além de vertigens e sangramentos nasais (LOURENÇO, 2006). Zearalenona - É um metabólito secundário produzido, principalmen- te, por Fusarium graminearum. Outras espécies, tais como Fusarium culmorum, Fusarium equisetii e Fusarium crookwellense também produzem essa substância e outras análogas. Essas espécies fúngicas são amplamente encontradas como contaminantes em muitos países (HAGLER et al., 2001). A denominação de toxina para a zearalenona é considerada inadequada uma vez que, embora biologicamente potente, ela é raramente tóxica. Sua estrutura, na realidade, assemelha-se ao 7ß-estradiol, principal hormônio produzido no ovário feminino humano. Zearalenona seria mais bem classificada como estrógeno não esteroidal ou um micoestrógeno (BENNETT e KLICH, 2003) (Fig. 4). A associação entre o consumo de grãos mofados e o hiperestrogenismo em suinos tem sido observada desde 1920. Elevadas concentrações de zearalenona na alimentação de suinos pode provocar distúrbios na concepção, aborto e outros problemas (KURTZ e MIROCHA, 1978). 21Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal isolada a partir de outras espécies fúngicas e recebeu diferentes deno- minações, tais como: clavacina, claviformina, expansina, micoina C e penicidina (CIEGLER et al., 1971). Ela chegou a ser utilizada como spray para nariz e garganta no tratamento do resfriado comum, e como pomada para o tratamento de infecções da pele (CIEGLER, 1977; CIEGLER et al., 1971). Entretanto, durante a década de 60 tornou-se claro que, não obstante apresentasse atividade antibacteriana, antiviral e antiprotozoário, ela poderia também ser tóxica a animais e plantas. Depois desses estudos ela foi, então, reclassificada como uma verda- deira micotoxina (BENNETT e KLICH, 2003). Quimicamente, a patulina é conhecida como 4-hidroxi-4H-furo[3, 2-c]piran-2(6H)-ona (Fig. 6). A doença conhecida como “bolor azul”, comum em maçã, pera, cereja e em outros frutos, é causada pelo fungo Penicillium expansum, conside- rado atualmente como o mais eficiente produtor de patulina na natureza. As espécies Aspergillus clavatus, Aspergillus giganteus e Asper- gillus terreus, também são produtoras de patulina (PIER e RICHARD, 1992). A patulina é comumente encontrada em suco não fermentado de maçã, muito embora não resista à fermentação em produtos deri- vados de cidra, onde ela é eficientemente metabolizada por leveduras (MOSS e LONG, 2002). Os estudos sobre sua toxicidade à saúde humana, conduzidos em laboratório, são inconclusivos. Mesmo assim, a Organização Mundial da Saúde estabeleceu a dose provisória diária de 0,4 mg/kg de peso corporal como limite máximo de absorção para essa micotoxina (TRUCKSESS e TANG, 2001). Fig. 6. Estrutura química da patulina. O O O OH 22 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Alcalóides ergóticos – Essas substâncias estão entre os mais inte- ressantes metabólitos secundários fúngicos, cuja produção ocorre nos escleródios de diversas espécies do gênero Claviceps. Os efeitos desses alcalóides sobre o homem são conhecidos desde a Idade Média, período em que alguns sintomas foram denominados de “fogo-sagrado” ou “fogo-de-santo-antônio”. No ano de 994, no sul da França, milhares de pessoas morreram após a ingestão de grãos de cereais infectados por Claviceps purpurea (KRUPPA, 2004). Também denominada de ergo- tismo, essa intoxicação ocorre após a ingestão de pão ou de outros produtos preparados a partir de farinha de grãos de centeio infectados pelo fungo. O ergotismo apresenta duas formas clássicas: a gangrenosa e a convulsiva. A forma gangrenosa afeta o suprimento de sangue para as extremidades do corpo, enquanto a convulsiva age diretamente sobre o sistema nervoso central (BENNETT e BENTLEY, 1999). Na pequena cidade francesa de Pont Saint Esprit, em 1951, ocorreu um surto de ergotismo, no qual cerca de 30 pessoas foram contaminadas, verifican- do-se a morte de pelos menos 5 delas (FULLER, 1968). O surto mais recente de ergotismo gangrenoso foi observado na Etiópia, entre 1977 e 1978, quando 140 pessoas foram afetadas, com a taxa de mortalida- de atingindo o percentual de 34%. Na Índia, em 1975, foi confirmado um surto de ergotismo convulsivo, afetando 78 pessoas, mas sem confirmação de mortes. Casos de ergotismo são bastante raros atual- mente, em virtude de a maioria dos escleródios ser eliminada durante o processamento nos moinhos. Somente níveis muito baixos de alcalóides ergóticos podem ser ainda detectados. Ademais, esses alcalóides são relativamente termolábeis, sendo quase sempre destruídos no processo de panificação (PERAICA et al., 1999). Os escleródios desses fungos possuem uma gama de alcalóides, dos quais os mais importantes são os derivados do ácido lisérgico. Além desses ocorrem, ainda, a ergometrina, a ergotamina e a ergotoxina (uma mistura de ergocornina, ergocristina e ergocriptina, todos tripeptí- deos cíclicos derivados do ácido lisérgico) (Fig. 7). As espécies produ- toras desses alcalóides, além de Claviceps purpurea (centeio, e outros cereais), inclui Claviceps paspali (gramíneas forrageiras), Claviceps fusiformis (em Pennisetum typhoides), Claviceps gigantea e Sphacelia sorghi (forma anamórfica de Claviceps) (HAWKSWORTH et al., 1995). 23Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Com as modernas técnicas de limpeza de grãos, o problema do ergotismo foi praticamente eliminado da cadeia alimentar humana. Entretanto, ain- da é uma ameaça sob o aspecto veterinário. Dentre os animais suscetí- veis de intoxicação, incluem-se o gado, os ovinos, os porcos e as aves. Os sintomas clínicos do ergotismo nesses animais se manifestam na forma de gangrena, aborto, convulsões, supressão da lactação, hiper- sensibilidade e ataxia (perda da coordenação dos movimentos muscula- res voluntários) (LORENZ, 1979). Fig. 7. Estruturas químicas da ergotamina e da ergometrina. Ergotamina Ergometrina HO O O O O H H H HN N N N N H C3 CH3 OH O H HH H H N N N CH3 CH3 26 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal ser produzida por diferentes espécies de Aspergillus (PURCHASE e VAN DER WATT, 1970; COLE e COX, 1981) (Fig. 9). Entretanto, Aspergillus versicolor é, reconhecidamente, a espécie mais importante como produtora dessa micotoxina. A atenção que os pesquisadores dispensam à esterigmatocistina é pelo fato de ela ser precursora das aflatoxinas. Por outro lado, ela apresenta toxicidade oral aguda baixa, em virtude de sua insolubilidade em água e nos sucos gástricos. Por essa razão, é provável que surtos atribuidos a essa substância sejam improváveis, tanto em humanos quanto em animais (TERAO, 1983). Graças a essa insolubilidade, doses experimentais aplicadas a animais de laboratório são absorvidas apenas em pequenas quantidades. Sua toxicidade como cancerígeno de fígado é de apenas 1/150 da aflatoxina B1, não obstante seja, ainda assim, mais potente que muitas outras substâncias cancerígenas. Por essa razão, a estrigmatocistina é aceita como um potencial indutor de câncer de fígado em humanos (TERAO, 1983). Fig. 9. Estrutura química da esterigmatocistina. Ácido fusárico, Fusarenona X, Fusarina C e Moniliformina - Embora menos importantes que os principais tricotecenos, a zearalenona e as fumonisinas, micotoxinas fusarianas, têm sido encontradas com ele- vada freqüência em cereais, participando, principalmente, da cadeia alimentar de aves (SANTIN et al., 2001). O ácido fusárico, por exemplo, OH O O O O Ome 27Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal interfere no consumo alimentar de aves, agindo na utilização do trip- tofano pelo cérebro, além de atuar sinergisticamente, aumentando a toxicidade de outras micotoxinas (BACON et al., 1996). Fusarenona X é um tricoteceno com reconhecida citotoxicidade, provocando apopto- se (morte celular programada ou a “autodestruição celular”) em células de rato, tanto in vivo quanto in vitro (MIURA et al., 2002). Fusarina C, encontrada principalmente em grãos de milho, tem sido relacionada ao desenvolvimento de câncer de esôfago em humanos (NAIR, 1998). Caracterizada como uma potente cardiotoxina (NAGARA et al., 1996), a moniliformina pode afetar frangos de corte, reduzindo o ganho de peso e aumentando o volume do coração (KUBENA et al., 1997). Rugulosina - Produzida por espécies de Penicillium, especialmente por Penicillium islandicum, a rugulosina é um bis-antraquinoide e é supeita de causar danos renais e hepáticos em humanos (SUTTAJIT, 1987). Em células de ratos e camundongos, essa substância induziu a forma- ção de tumores em células hepáticas de camundongos machos (UENO et al., 1980). Luteosquirina - Também produzida por Penicillium islandicum, a lute- osquirina é uma antraquinona e estaria associada à doença do “arroz amarelo”, no Japão. Sua capacidade nefrotóxica e hepatotóxica não está conclusivamente provada. Entretanto, o fungo produtor é comu- mente isolado a partir de alimentos (COMERIO, 2000). Cicloclorotina - Considerada como hepatóxica, a cicloclorotina é igual- mente produzida por Penicillium islandicum. Sua capacidade para causar efeitos tóxicos a células hepáticas em cultura foi demonstrada por OHMI et al. (2001). Ácido penicílico – Produzido por algumas espécies de Penicillium, mas principalmente pelo fungo Aspergillus ochraceus, o ácido peni- cílico é considerado uma micotoxina potencialmente cancerígena. Testes em camundongos machos confirmaram essa capacidade (CHAN et al., 1984). 28 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Ácido tenuazônico - Espécies do gênero Alternaria produzem cerca de 71 diferentes micotoxinas e fitotoxinas (KWASNA, 1992). Os metabó- litos mais comuns são o alternariol, o alternariol metil éter, o altenueno e o ácido tenuazônico. Em dietas de aves contendo esses metabólitos, apenas o ácido tenuazônico induziu a mortalidade de embriões de frangos e morte de pintos de 1 dia (DAVIS et al., 1977; GLAMBRONE et al., 1978). Metabólitos de Alternaria spp. têm sido associados a uma síndrome conhecida como doença hemorrágica das aves (GRIFFIN e CHU, 1983). Fomopsinas - Embora menos estudadas, as fomopsinas começam a despertar interesse dos pesquisadores, especialmente pela provável toxicidade a ovelhas. As fomopsinas A e B, por exemplo, obtidas a partir do fungo Phomopsis leptostromiformis, foram capazes de in- duzir lupinose (atrofia aguda do fígado) em ovinos e em ratos jovens (CULVENOR et al., 1977). Evidências mais recentes indicam que além das fomopsinas A e B, esse fungo produz também outros metabólitos tóxicos (ALLEN e HANCOCK, 1989). Outras espécies de Phomopsis são capazes de produzir também a micotoxina roridina A (SAMPLES et al., 1984). A partir de uma cultura de Phomopsis sp., um endofítico da casca de Cavendishia pubescens, pesquisadores obtiveram paspalitrem A e paspalitrem C, micotoxinas tremogênicas isoladas, até então, ape- nas de esclerócios de Caviceps paspali. Essas substâncias provocam desordens neurológicas em gado (BILLS et al., 1992). Regulamentação de Micotoxinas no Brasil e no mundo Legislações têm sido adotadas em muitos países com o intuito de proteger os consumidores contra os efeitos nocivos das micotoxinas em alimentos in natura e processados, e até mesmo em rações para animais de abate e de estimação. As legislações mais conhecidas são aquelas que regulamentam os níveis de aflatoxinas, não obstante legis- lações para outras micotoxinas estejam sendo também implementadas rapidamente. Existem diversos fatores que conduzem à elaboração 31Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal possui a legislação mais avançada. Com relação Ásia/Oceania cerca de 26 países possuem legislação para micotoxinas, representando 88% da população daquela região. A Nova Zelândia, entretanto, apresenta legislação própria, com algumas diferenças em relação à da Ásia e ao norte da Austrália. Atualmente, Austrália e Nova Zelândia estão harmo- nizando suas legislações que incluem limites para micotoxinas exóticas, tais como o ácido agárico e as fomopsinas. Nesses extensos continen- tes, as legislações da China e da República Islâmica do Iran são as mais completas e detalhadas. No continente uropeu 39 países, representando 99% da população europeia, apresentam legislações para a regulação de micotoxinas em alimentos e rações. Comparada com outras regiões do mundo, a Europa dispõe da mais completa e detalhada legislação sobre micotoxinas em alimentos. Na comunidade européia já foram harmonizadas as legisla- ções para aflatoxinas em vários alimentos, como para aflatoxina M1 em leite, ocratoxina A em cereais e frutos desidratados, para patulina em suco de maçã e produtos derivados de maçã, e para aflatoxina B1 em várias rações. Ações preliminares já foram iniciadas com relação ao deoxinivalenol em cereais e em produtos derivados de cereais. Alguns países que ainda não fazem parte da comunidade européia possuem legislação ainda mais avançada que a própria comunidade. Na América do Norte, os Estados Unidos e o Canadá possuem legisla- ção para micotoxinas há muitos anos, e continuam aperfeiçoando os métodos de amostragem e análise. Nos dois países os limites para afla- toxinas são estabelecidos para a soma B1+B2+G1 e G2. No Canadá, além dos limites impostos para as toxinas fusarianas, existem também percentagens de tolerância para grãos danificados em espiguetas de trigo, tanto para o tipo mole quanto o tipo duro, além de limites para outros grãos. Existem, também, limites para a presença de esclerócios de Claviceps purpurea em várias culturas (é nos esclerócios onde se acumulam os alcalóides ergóticos). Nos Estados Unidos, existem deta- lhados limites de tolerância para a soma das fumonisinas B1, B2 e B3 em uma ampla variedade de produtos de milho. Esse é único país no mundo onde ocorrem limites para a soma dessas três fumonisinas. 32 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Na América Latina, 19 países dispõem de legislação para micotoxi- nas, representando quase 91% da população continental. A legislação para aflatoxinas encontra-se harmonizada no Mercosul, englobando a Argentina, o Brasil, o Paraguai e o Uruguai. O Uruguai possui a mais detalhada legislação da América Latina, com limites para os alcalóides ergóticos em rações, o que é inédito em qualquer legislação no mundo. No continente sul-americano, a legislação cobre, especialmente, as se- guintes micotoxinas, em alimentos e em algumas rações: aflatoxina B1, aflatoxinas B1/G1, aflatoxinas totais (B1+B2+G1+G2), fumonisina B1, desoxinivalenol, ocratoxina A, patulina e a zearalenona (Tabela 1) Tabela 1. Legislação para micotoxinas em alimentos e rações nos dife- rentes continentes [adaptado de FAO(2003) e do site www.micotoxinas. com.br]. Continente África Micotoxina Afl. B1(3) Afl. G1(1) Afl. B1+G1(2) Afl. M1(1) Afl. B1+B2+G1+G2(3) Ocratoxina A(3) Patulina(1) Zearalenona(3) Substrato/limite Para todos os alimentos: B1: 5 ppb; B1+B2+G1+G2: 10 ppb Amendoim para exportação: B1:5 ppb Amendoim e seus produtos; óleos vegetais: B1+B2+G1+G2:20 ppb Alimentos infantis: B1:0 ppb Leite fluido: M1:1 ppb Rações: B1: 50 ppb Produtos de amendoim como ração:B1: 50 ppb Produtos de amendoim como ingredientes para ração: B1: 300 ppb Amendoim, milho e sorgo: B1: 5 ppb; G1: 4 ppb Rações para aves: B1: B+G1: 10 ppb Farinha de arroz: B1: 5 ppb; G1: 4 ppb (Continua...) 33Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal (Continua...) Ásia/Oceania Ácido agárico(1) Afl. B1(3) Afl. M1(1) Afl. B1+B2+G1+G2(3) Diacetoxiscirpenol(1) Desoxinivalenol(2) Fomopsinas(1) Fumonisina B1(1) Fumonisina B1+B2(1) Ocratoxina A(3) Patulina(1) T2(3) Zearalenona(3) Todos os alimentos: B1+B2+G1+G2: 5 ppb Fomopsinas: 5 ppb Manteiga de amendoim, nozes em geral: B1+B2+G1+G2: 15 ppb Nozes e seus produtos: B1+B2+G1+G2: 20 ppb Castanha-do-brasil: B1+B2+G1+G2: 15 ppb Arroz, óleos comestíveis: B1: 10 ppb Aveia, cevada, feijão, sorgo, trigo, outros grãos e alimentos fermentados: B1: 20 ppb Leite fluido e produtos lácteos: B1: 0,5 ppb Amendoim e produtos: B1+B2+G1+G2+M1+M2: 20 ppb Todos alimentos: 30 ppb Farelo de amendoim para exportação: B1: 120 ppb Rações: B1: 10 ppb Manteiga de amendoim, amendoim em grão, nozes: B1+B2+G1+G2 : 15 ppb Alimentos para crianças até 3 anos de idade: B1+B2+G1+G2: 1 ppb Rações: B1: 1000 ppb Copra em ração para vacas, porcos, marrecos, ovinos: B1+B2+G1+G2: 1.000 ppb Farelos de amendoim, de gergelim, de colza, mandioca em ração de frangos: B1+B2+G1+G2: 200 ppb Tabela 1. (Continuação...) Continente Micotoxina Substrato/limite 36 Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal Considerações Finais A contaminação de alimentos e rações por micotoxinas representa um sério problema de saúde para humanos e animais, além de se constituir em considerável obstáculo à economia de países da África, Ásia e da América Latina, nos quais a balança comercial se baseia nas exporta- ções de commodities. Em virtude da presença de micotoxinas, milhões de dólares são perdidos anualmente, recursos que poderiam ser utiliza- dos em projetos para a melhoria de vida dessas populações. A despeito dos esforços desenvolvidos desde a década de 1970, tanto por países em desenvolvimento quanto pelos países importadores, com intuito de reduzir a contaminação por micotoxinas, a situação continua ainda preocupante. O reconhecimento dos problemas causados pelas micotoxinas nos ali- mentos e rações é, sem dúvida, o primeiro passo para a implementação de programas que permitam a adoção de medidas apropriadas para a prevenção e a redução do problema. Tais programas devem incluir não apenas as medidas de prevenção de ocorrência de micotoxinas em commodities, mas, também, o uso de métodos para sua remoção ou descontaminação. Devem, ademais, ter uma rotina de inspeção, legis- lação para controlar o fluxo de commodities contaminadas com mico- toxinas no comércio nacional e internacional, bem como desenvolver atividades de informação, comunicação e, principalmente, de educação (SMITH et al., 1995). Na América Latina, países como a Argentina, o Brasil e o Uruguai, a despeito da escassez de recursos financeiros e humanos, têm respon- dido muito bem aos problemas de contaminação de micotoxinas nas commodities regionais. Os cientistas envolvidos nas pesquisas com essas substâncias têm produzido resultados de nível semelhante aos produzidos em países da Comunidade Européia e da América do Norte. Um recente artigo de compilação dos trabalhos publicados na América Latina comprova essa afirmativa (RODRIGUEZ-AMAYA, 2002). No Brasil, de acordo com a Resolução RDC no 274, da ANVISA (Minis- 37Micotoxinas: Importância na Alimentação e na Saúde Humana e Animal tério da Saúde)(Diário Oficial da União, de 16/10/2002), alimentos para o consumo humano estão sujeitos ao limite máximo para aflatoxinas (B1+B2+G1+G2) de 20μg/kg (20ppb), enquanto para leite fluido é de M1= 0,5μ/kg, e para leite em pó é de M1= 5,0μg/kg. Com relação a alimentos para consumo animal (matérias-primas e rações), por outro lado, a Portaria MA/SNAD/SFA no 183, do Ministério da Agricultura (Diário Oficial da União, de 09/11/1988), estipula, para qualquer maté- ria-prima, para alimentação direta ou como ingrediente para rações, o limite máximo para aflatoxinas (B1+B2+G1+G2) de 50 μg/kg. Muito embora nossa legislação contemple apenas as aflatoxinas, cientistas brasileiros já estão, há bastante tempo, conduzindo pesquisas com outras importantes micotoxinas, como a citrinina, as fumonisinas, a ocratoxina A, a patulina, os tricotecenos e outras menos freqüentes. Falta no Brasil, entretanto, um maior rigor no cumprimento das porta- rias. As fiscalizações são esporádicas e os laboratórios encarregados de realizar as análises encontram-se, em sua grande maioria, desprovidos de material e de pessoal especializado. Por outro lado, as discrepân- cias observadas quanto aos limites e as micotoxinas sob legislação nos países da America Latina não são muito diferentes das discrepâncias observadas mesmo para continentes com países desenvolvidos. Atu- almente, tem sido observada uma tendência na harmonização das le- gislações em todos os continentes, bem com uma tendência à redução dos limites máximos permitidos, especialmente para as aflatoxinas. A legislação sobre micotoxinas deveria estar sempre inserida nas agendas de discussão do agronegócio, nos diferentes países. É provável mesmo que em futuro não muito distante, e em virtude do crescente intercâm- bio de commodities entre os países, ocorra uma harmonização da legis- lação para micotoxinas em nível global. Convém enfatizar que a amos- tragem de micotoxinas nas cadeias alimentares humana e animal exige o emprego de corretas técnicas estatísticas de amostragem, sem as quais os resultados finais obtidos serão inválidos (COKER et al., 1995). 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